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  • 病理学与病理生理学专业毕业论文 [精品论文] 半乳糖化壳聚糖-低
  • 作者:管理员 发布日期:2021-11-24点击率:
  •   病理学与病理生理学专业毕业论文 [精品论文] 半乳糖化壳聚糖-低分子量聚乙烯亚胺DNA复合物的肝靶向性基因转导研究病理学与病理生理学专业毕业论文[精品论文]半乳糖化壳聚糖-低分子量聚乙烯亚胺DNA复合物的肝靶向性基因转导研究病理学与病理生理学专业毕业论文[精品论文]半乳糖化壳聚糖-低分子量聚乙烯亚胺DNA复合物的肝靶向性基因转导研究关键词半乳糖化壳聚糖低分子量聚乙烯亚胺DNA复合物肝细胞基因转导转染效率摘要目的构建去唾液酸糖蛋白受体介导的半乳糖基-壳聚糖-聚乙烯亚胺肝靶向非病毒转基因载体研究其在体内外的肝靶向转染效率方法第一部分以壳聚糖和乳糖酸先合成半乳糖化壳聚糖作为去唾液酸糖蛋白受体的配体再通过透析法在半乳糖壳聚糖的骨架上偶联低分子量P

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      亡发生通过HE染色形态学观察实验组小鼠主要器官无明显病理变化荧光显微镜和流式细胞仪检测证实GC-PEIDNA复合物在肝细胞系QSG7701QSG7701coreL02中的GFP表达明显高于非肝细胞系SGC-7901HBE细胞GC-PEIDNAPBS复合物的转染效率高于GC-PEI5GSDNA组游离半乳糖可拮抗GC-PEIDNA复合物在QSG7701core中的转染效率GC-PEIDNA复合物在含血清培基中的转染效率较无血清时略有下降体内实验表明转染48小时后两复合物组GC-PEIPBSDNAGC-PEI5GSDNA的小鼠肝组织在荧光显微镜下可以明显检测到绿色荧光点于转染1周后荧光表达减弱而心脾肺肾等余主要器官中检测不到GFP表达两对照组肝组织中未见明显荧光结论1GC-PEI聚合物能够在体内外特异性将外源基因导入肝细胞具有良好的肝靶向性2GC-PEIDNA复合物能有效地结合和保护DNA3在检测范围内GC-PEI聚合物对细胞和组织未呈现明确毒性4如何提高体内转染效率是有待研究的问题目的构建去唾液酸糖蛋白受体介导的半乳糖基-壳聚糖-聚乙烯亚胺肝靶向非病毒转基因载体研究其在体内外的肝靶向转染效率方法第一部分以壳聚糖和乳糖酸先合成半乳糖化壳聚糖作为去唾液酸糖蛋白受体的配体再通过透析法在半乳糖壳聚糖的骨架上偶联低分子量PEI合成半乳糖化壳聚糖聚乙烯亚胺聚合物与pEGFP-C1在001MPBS150mmolLNaCl5GS中自组装成三种不同溶媒介导的GC-PEIDNA复合物通过琼脂糖凝胶电泳和结合实验研究三种GC-PEIDNA复合物结合和组装DNA能力并通过血清和DNase消化实验来检测GC-PEI复合物对DNA的保护能力为了筛选出最合适的GC-PEIDNA复合物及其最佳质量比选用透射电子显微镜和粒径分析仪来检测复合物粒径大小及第二部分在体外通过MTT法检测聚形态粒径分析仪进行Zeta电位测定合物对5种细胞QSG7701QSG7701coreL02SGC-7901HBE的毒性并将聚合物尾静脉注入小鼠观察其体内急性毒性反应第三部分GC-PEI聚合物在体内外的肝靶向转染效率研究GC-PEIDNA复合物分别转染肝细胞系QSG7701coreL02及非肝细胞系SGC-7901HBE细胞以阳QSG7701离子脂质体lipofectamineTM2000裸DNA分别做为阳阴性对照置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达及通过流式细胞仪检测其转染效率此外利用血清和游离半乳糖分别检测二者对GC-PEI聚合物肝靶向转染效率的影响将二种不同溶媒的GC-PEIDNA复合物经尾静脉注射导入小鼠体内取肝心脾肺肾等主要器官做冰冻切片置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况以裸质粒和阳离子脂质体lipofect-amineTM2000作为对照结果琼脂糖凝胶电泳和结合实验结果显示三种不同溶媒的GC-PEI聚合物均能有效地结合DNA在聚合物与DNA质量比为251时聚合物结合DNA能力最佳与DNA的结合率可达93GC-PEIDNA复合物能保护所携带的DNA免受核酸酶和血清的降解复合物粒径大小分布于50200nm之间时其形成的粒子呈规则的球形有明显的核壳结构在150mmolLNaCl中复合物粒径最大其次为在001MPBS中在5GS中复合物形成粒子最小随着聚合物与DNA质量比的增大0251251复合物的粒径结合能力zeta电位均发生明显的变化其中复合物的粒径变小而DNA结合能力及zeta电位增大在低质量比时GC-PEIDNA复合物在150mmolLNaCl中表现出不稳定出现相互聚集现象MTT结果表明GC-PEI聚合物在检测范围内对5种细胞均未显示出明显毒性相对细胞活力值均高于80形态学观察显示GC-PEI聚合物50μgmL组与阴性对照组细胞形态相似动物体内急性毒性实验显示通过尾静脉注射50300μg剂量的GC-PEI聚合物入小鼠后实验小鼠两周内无急性毒性反应和死亡发生通过HE染色形态学观察实验组小鼠主要器官无明显病理变化荧光显微镜和流式细胞仪检测证实GC-PEIDNA复合物在肝细胞系QSG7701QSG7701coreL02中的GFP表达明显高于非肝细胞系SGC-7901HBE细胞GC-PEIDNAPBS复合物的转染效率高于GC-PEI5GSDNA组游离半乳糖可拮抗GC-PEIDNA复合物在QSG7701core中的转染效率GC-PEIDNA复合物在含血清培基中的转染效率较无血清时略有下降体内实验表明转染48小时后两复合物组GC-PEIPBSDNAGC-PEI5GSDNA的小鼠肝组织在荧光显微镜下可以明显检测到绿色荧光点于转染1周后荧光表达减弱而心脾肺肾等余主要器官中检测不到GFP表达两对照组肝组织中未见明显荧光结论1GC-PEI聚合物能够在体内外特异性将外源基因导入肝细胞具有良好的肝靶向性2GC-PEIDNA复合物能有效地结合和保护DNA3在检测范围内GC-PEI聚合物对细胞和组织未呈现明确毒性4如何提高体内转染效率是有待研究的问题目的构建去唾液酸糖蛋白受体介导的半乳糖基-壳聚糖-聚乙烯亚胺肝靶向非病毒转基因载体研究其在体内外的肝靶向转染效率方法第一部分以壳聚糖和乳糖酸先合成半乳糖化壳聚糖作为去唾液酸糖蛋白受体的配体再通过透析法在半乳糖壳聚糖的骨架上偶联低分子量PEI合成半乳糖化壳聚糖聚乙烯亚胺聚合物与pEGFP-C1在001MPBS150mmolLNaCl5GS中自组装成三种不同溶媒介导的GC-PEIDNA复合物通过琼脂糖凝胶电泳和结合实验研究-PEIDNA复合物结合和组装DNA能力并通过血清和DNase消化实验三种GC来检测GC-PEI复合物对DNA的保护能力为了筛选出最合适的GC-PEIDNA复合物及其最佳质量比选用透射电子显微镜和粒径分析仪来检测复合物粒径大小及形态粒径分析仪进行Zeta电位测定第二部分在体外通过MTT法检测聚合物对5种细胞QSG7701QSG7701coreL02SGC-7901HBE的毒性并第三部分GC-PEI聚合将聚合物尾静脉注入小鼠观察其体内急性毒性反应物在体内外的肝靶向转染效率研究GC-PEIDNA复合物分别转染肝细胞系QSG7701QSG7701coreL02及非肝细胞系SGC-7901HBE细胞以阳离子脂质体lipofectamineTM2000裸DNA分别做为阳阴性对照置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达及通过流式细胞仪检测其转染效率此-PEI聚合物肝靶向转染效率的影外利用血清和游离半乳糖分别检测二者对GC响将二种不同溶媒的GC-PEIDNA复合物经尾静脉注射导入小鼠体内取肝心脾肺肾等主要器官做冰冻切片置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况以裸质粒和阳离子脂质体lipofect-amineTM2000作为对照结果琼脂糖凝胶电泳和结合实验结果显示三种不同溶媒的GC-PEI聚合物均能有效地结合DNA在聚合物与DNA质量比为251时聚合物结合DNA能力最佳与DNA的结合率可达93GC-PEIDNA复合物能保护所携带的DNA免受核酸酶和血清的降解复合物粒径大小分布于50200nm之间时其形成的粒子呈规则的球形有明显的核壳结构在150mmolLNaCl中

      复合物粒径最大其次为在001MPBS中在5GS中复合物形成粒子最小随着聚合物与DNA质量比的增大0251251复合物的粒径结合能力zeta电位均发生明显的变化其中复合物的粒径变小而DNA结合能力及zeta电位增大在低质量比时GC-PEIDNA复合物在150mmolLNaCl中表现出不稳定出现相互聚集现象MTT结果表明GC-PEI聚合物在检测范围内对5种细胞均未显示出明显毒性相对细胞活力值均高于80形态学观察显示GC-PEI聚合物50μgmL组与阴性对照组细胞形态相似动物体内急性毒性实验显示通过尾静脉注射50300μg剂量的GC-PEI聚合物入小鼠后实验小鼠两周内无急性毒性反应和死亡发生通过HE染色形态学观察实验组小鼠主要器官无明显病理变化荧光显微镜和流式细胞仪检测证实GC-PEIDNA复合物在肝细胞系QSG7701QSG7701coreL02中的GFP表达明显高于非肝细胞系SGC-7901HBE细胞GC-PEIDNAPBS复合物的转染效率高于GC-PEI5GSDNA组游离半乳糖可拮抗GC-PEIDNA复合物在QSG7701core中的转染效率GC-PEIDNA复合物在含血清培基中的转染效率较无血清时略有下降体内实验表明转染48小时后两复合物组GC-PEIPBSDNAGC-PEI5GSDNA的小鼠肝组织在荧光显微镜下可以明显检测到绿色荧光点于转染1周后荧光表达减弱而心脾肺肾等余主要器官中检测不到GFP表达两对照组肝组织中未见明显荧光结论1GC-PEI聚合物能够在体内外特异性将外源基因导入肝细胞具有良好的肝靶向性2GC-PEIDNA复合物能有效地结合和保护DNA3在检测范围内GC-PEI聚合物对细胞和组织未呈现明确毒性4如何提高体内转染效率是有待研究的问题目的构建去唾液酸糖蛋白受体介导的半乳糖基-壳聚糖-聚乙烯亚胺肝靶向非病毒转基因载体研究其在体内外的肝靶向转染效率方法第一部分以壳聚糖和乳糖酸先合成半乳糖化壳聚糖作为去唾液酸糖蛋白受体的配体再通过透析法在半乳糖壳聚糖的骨架上偶联低分子量PEI合成半乳糖化壳聚糖聚乙-C1在001MPBS150mmolLNaCl5GS中自组装成烯亚胺聚合物与pEGFP三种不同溶媒介导的GC-PEIDNA复合物通过琼脂糖凝胶电泳和结合实验研究三种GC-PEIDNA复合物结合和组装DNA能力并通过血清和DNase消化实验来检测GC-PEI复合物对DNA的保护能力为了筛选出最合适的GC-PEIDNA复合物及其最佳质量比选用透射电子显微镜和粒径分析仪来检测复合物粒径大小及形态粒径分析仪进行Zeta电位测定第二部分在体外通过MTT法检测聚合物对5种细胞QSG7701QSG7701coreL02SGC-7901HBE的毒性并将聚合物尾静脉注入小鼠观察其体内急性毒性反应第三部分GC-PEI聚合-PEIDNA复合物分别转染肝细胞系物在体内外的肝靶向转染效率研究GCQSG7701QSG7701coreL02及非肝细胞系SGC-7901HBE细胞以阳TM2000裸DNA分别做为阳阴性对照置荧光显离子脂质体lipofectamine微镜下观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达及通过流式细胞仪检测其转染效率此外利用血清和游离半乳糖分别检测二者对GC-PEI聚合物肝靶向转染效率的影响将二种不同溶媒的GC-PEIDNA复合物经尾静脉注射导入小鼠体内取肝心脾肺肾等主要器官做冰冻切片置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况以裸质粒和阳离子脂质体lipofect-amineTM2000作为对照结果琼脂糖凝胶电泳和结合实验结果显示三种不同溶媒的GC-PEI聚合物均能有效地结合DNA在聚合物与DNA质量比为251时聚合物结合DNA能力最佳与DNA的结合率可达93GC-PEIDNA复合物能保护所携带的DNA免受核酸酶和血清的降解复合物粒径大小分布于50200nm之间时其形成的粒子呈规则的球形有明显的核壳结构在150mmolLNaCl中复合物粒径最大其次为在001MPBS中在5GS中复合物形成粒子最小随着聚合物与DNA质量比的增大0251251复合物的粒径结合能力zeta电位均发生明显的变化其中复合物的粒径变小而DNA结合能力及zeta电位增大在低质量比时GC-PEIDNA复合物在150mmolLNaCl中表现出不稳定出现相互聚集现象MTT结果表明GC-PEI聚合物在检测范围内对5种细胞均未显示出明显毒性相对细胞活力值均高于80形态学观察显示GC-PEI聚合物50μgmL组与阴性对照组细胞形态相似动物体内急性毒性实验显示通过尾静脉注射50300μg剂量的GC-PEI聚合物入小鼠后实验小鼠两周内无急性毒性反应和死亡发生通过HE染色形态学观察实验组小鼠主要器官无明显病理变化荧光显微镜和流式细胞仪检测证实GC-PEIDNA复合物在肝细胞系QSG7701QSG7701coreL02中的GFP表达明显高于非肝细胞系SGC-7901HBE细胞GC-PEIDNAPBS复合物的转染效率高于GC-PEI5GSDNA组游离半乳糖可拮抗GC-PEIDNA复合物在QSG7701core中的转染效率GC-PEIDNA复合物在含血清培基中的转染效率较无血清时略有下降体内实验表明转染48小时后两复合物组GC-PEIPBSDNAGC-PEI5GSDNA的小鼠肝组织在荧光显微镜下可以明显检测到绿色荧光点于转染1周后荧光表达减弱而心脾肺肾等余主要器官中检测不到GFP表达两对照组肝组织中未见明显荧光结论1GC-PEI聚合物能够在体内外特异性将外源基因导入肝细胞具有良好的肝靶向性2GC-PEIDNA复合物能有效地结合和保护DNA3在检测范围内GC-PEI聚合物对细胞和组织未呈现明确毒性4如何提高体内转染效率是有待研究的问题目的构建去唾液酸糖蛋白受体介导的半乳糖基-壳聚糖-聚乙烯亚胺肝靶向非病毒转基因载体研究其在体内外的肝靶向转染效率方法第一部分以壳聚糖和乳糖酸先合成半乳糖化壳聚糖作为去唾液酸糖蛋白受体的配体再通过合成半乳糖化壳聚糖聚乙透析法在半乳糖壳聚糖的骨架上偶联低分子量PEI烯亚胺聚合物与pEGFP-C1在001MPBS150mmolLNaCl5GS中自组装成三种不同溶媒介导的GC-PEIDNA复合物通过琼脂糖凝胶电泳和结合实验研究三种GC-PEIDNA复合物结合和组装DNA能力并通过血清和DNase消化实验-PEI复合物对DNA的保护能力为了筛选出最合适的GC-PEIDNA复合来检测GC物及其最佳质量比选用透射电子显微镜和粒径分析仪来检测复合物粒径大小及形态粒径分析仪进行Zeta电位测定第二部分在体外通过MTT法检测聚QSG7701QSG7701coreL02SGC-7901HBE的毒性并合物对5种细胞将聚合物尾静脉注入小鼠观察其体内急性毒性反应第三部分GC-PEI聚合-PEIDNA复合物分别转染肝细胞系物在体内外的肝靶向转染效率研究GCQSG7701QSG7701coreL02及非肝细胞系SGC-7901HBE细胞以阳离子脂质体lipofectamineTM2000裸DNA分别做为阳阴性对照置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达及通过流式细胞仪检测其转染效率此外利用血清和游离半乳糖分别检测二者

      对GC-PEI聚合物肝靶向转染效率的影响将二种不同溶媒的GC-PEIDNA复合物经尾静脉注射导入小鼠体内取肝心脾肺肾等主要器官做冰冻切片置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况以裸质粒和阳离子脂质体lipofect-amineTM2000作为对照结果琼脂糖凝胶电泳和结合实验结果显示三种不同溶媒的GC-PEI聚合物均能有效地结合DNA在聚合物与DNA质量比为251时聚合物结合DNA能力最佳与DNA的结合率可达93GC-PEIDNA复合物能保护所携带的DNA免受核酸酶和血清的降解复合物粒径大小分布于50200nm之间时其形成的粒子呈规则的球形有明显的核壳结构在150mmolLNaCl中复合物粒径最大其次为在001MPBS中在5GS中复合物形成粒子最小随着聚合物与DNA质量比的增大0251251复合物的粒径结合能力zeta电位均发生明显的变化其中复合物的粒径变小而DNA结合能力及zeta电位增大在低质量比时GC-PEIDNA复合物在150mmolLNaCl中表现出不稳定出现相互聚集现象MTT结果表明GC-PEI聚合物在检测范围内对5种细胞均未显示出明显毒性相对细胞活力值均高于80形态学观察显示GC-PEI聚合物50μgmL组与阴性对照组细胞形态相似动物体内急性毒性实验显示通过尾静脉注射50300μg剂量的GC-PEI聚合物入小鼠后实验小鼠两周内无急性毒性反应和死亡发生通过HE染色形态学观察实验组小鼠主要器官无明显病理变化荧光显微镜和流式细胞仪检测证实GC-PEIDNA复合物在肝细胞系QSG7701QSG7701coreL02中的GFP表达明显高于非肝细胞系SGC-7901HBE细胞GC-PEIDNAPBS复合物的转染效率高于GC-PEI5GSDNA组游离半乳糖可拮抗GC-PEIDNA复合物在QSG7701core中的转染效率GC-PEIDNA复合物在含血清培基中的转染效率较无血清时略有下降体内实验表明转染48小时后两复合物组GC-PEIPBSDNAGC-PEI5GSDNA的小鼠肝组织在荧光显微镜下可以明显检测到绿色荧光点于转染1周后荧光表达减弱而心脾肺肾等余主要器官中检测不到GFP表达两对照组肝组织中未见明显荧光结论1GC-PEI聚合物能够在体内外特异性将外源基因导入肝细胞具有良好的肝靶向性2GC-PEIDNA复合物能有效地结合和保护DNA3在检测范围内GC-PEI聚合物对细胞和组织未呈现明确毒性4如何提高体内转染效率是有待研究的问题壳聚糖-聚乙烯亚胺肝靶向非病目的构建去唾液酸糖蛋白受体介导的半乳糖基-毒转基因载体研究其在体内外的肝靶向转染效率方法第一部分以壳聚糖和乳糖酸先合成半乳糖化壳聚糖作为去唾液酸糖蛋白受体的配体再通过透析法在半乳糖壳聚糖的骨架上偶联低分子量PEI合成半乳糖化壳聚糖聚乙烯亚胺聚合物与pEGFP-C1在001MPBS150mmolLNaCl5GS中自组装成-PEIDNA复合物通过琼脂糖凝胶电泳和结合实验研究三种不同溶媒介导的GC三种GC-PEIDNA复合物结合和组装DNA能力并通过血清和DNase消化实验来检测GC-PEI复合物对DNA的保护能力为了筛选出最合适的GC-PEIDNA复合物及其最佳质量比选用透射电子显微镜和粒径分析仪来检测复合物粒径大小及形态粒径分析仪进行Zeta电位测定第二部分在体外通过MTT法检测聚QSG7701QSG7701coreL02SGC-7901HBE的毒性并合物对5种细胞将聚合物尾静脉注入小鼠观察其体内急性毒性反应第三部分GC-PEI聚合物在体内外的肝靶向转染效率研究GC-PEIDNA复合物分别转染肝细胞系QSG7701QSG7701coreL02及非肝细胞系SGC-7901HBE细胞以阳离子脂质体lipofectamineTM2000裸DNA分别做为阳阴性对照置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达及通过流式细胞仪检测其转染效率此外利用血清和游离半乳糖分别检测二者对GC-PEI聚合物肝靶向转染效率的影响将二种不同溶媒的GC-PEIDNA复合物经尾静脉注射导入小鼠体内取肝心脾肺肾等主要器官做冰冻切片置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况以裸质粒和阳离子脂质体lipofect-amineTM2000作为对照结果琼脂糖凝胶电泳和结合实验结果显示三种不同溶媒的GC-PEI聚合物均能有效地结合DNA在聚合物与DNA质量比为251时聚合物结合DNA能力最佳与DNA的结合率可达93GC-PEIDNA复合物能保护所携带的DNA免受核酸酶和血清的降解复合物粒径大小分布于50200nm之间时其形成的粒子呈规则的球形有明显的核壳结构在150mmolLNaCl中复合物粒径最大其次为在001MPBS中在5GS中复合物形成粒子最小随着聚合物与DNA质量比的增大0251251复合物的粒径结合能力zeta电位均发生明显的变化其中复合物的粒径变小而DNA结合能力及zeta电位增大在低质量比时GC-PEIDNA复合物在150mmolLNaCl中表现出不稳定出现相互聚集现象MTT结果表明GC-PEI聚合物在检测范围内对5种细胞均未显示出明显毒性相对细胞活力值均高于80形态学观察显示GC-PEI聚合物50μgmL组与阴性对照组细胞形态相似动物体内急性毒性实验显示通过尾静脉注射50300μg剂量的GC-PEI聚合物入小鼠后实验小鼠两周内无急性毒性反应和死亡发生通过HE染色形态学观察实验组小鼠主要器官无明显病理变化荧光显微镜和流式细胞仪检测证实GC-PEIDNA复合物在肝细胞系QSG7701QSG7701coreL02中的GFP表达明显高于非肝细胞系SGC-7901HBE细胞GC-PEIDNAPBS复合物的转染效率高于GC-PEI5GSDNA组游离半乳糖可拮抗GC-PEIDNA复合物在QSG7701core中的转染效率GC-PEIDNA复合物在含血清培基中的转染效率较无血清时略有下降体内实验表明转染48小时后两复合物组GC-PEIPBSDNAGC-PEI5GSDNA的小鼠肝组织在荧光显微镜下可以明显检测到绿色荧光点于转染1周后荧光表达减弱而心脾肺肾等余主要器官中检测不到GFP表达两对照组肝组织中未见明显荧光结论1GC-PEI聚合物能够在体内外特异性将外源基因导入肝细胞具有良好的肝靶向性2GC-PEIDNA复合物能有效地结合和保护DNA3在检测PEI聚合物对细胞和组织未呈现明确毒性4如何提高体内范围内GC-转染效率是有待研究的问题目的构建去唾液酸糖蛋白受体介导的半乳糖基-壳聚糖-聚乙烯亚胺肝靶向非病毒转基因载体研究其在体内外的肝靶向转染效率方法第一部分以壳聚糖和乳糖酸先合成半乳糖化壳聚糖作为去唾液酸糖蛋白受体的配体再通过透析法在半乳糖壳聚糖的骨架上偶联低分子量PEI合成半乳糖化壳聚糖聚乙烯亚胺聚合物与pEGFP-C1在001MPBS150mmolLNaCl5GS中自组装成三种不同溶媒介导的GC-PEIDNA复合物通过琼脂糖凝胶电泳和结合实验研究-PEIDNA复合物结合和组装DNA能力并通过血清和DNase消化实验三种GC来检测GC-PEI复合物对DNA的保护能力为了筛选出最合适的GC-PEIDNA复合物及其最佳质量比选用透射电子显微镜和粒径

      分析仪来检测复合物粒径大小及形态粒径分析仪进行Zeta电位测定第二部分在体外通过MTT法检测聚合物对5种细胞QSG7701QSG7701coreL02SGC-7901HBE的毒性并将聚合物尾静脉注入小鼠观察其体内急性毒性反应第三部分GC-PEI聚合物在体内外的肝靶向转染效率研究GC-PEIDNA复合物分别转染肝细胞系QSG7701QSG7701coreL02及非肝细胞系SGC-7901HBE细胞以阳离子脂质体lipofectamineTM2000裸DNA分别做为阳阴性对照置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达及通过流式细胞仪检测其转染效率此外利用血清和游离半乳糖分别检测二者对GC-PEI聚合物肝靶向转染效率的影响将二种不同溶媒的GC-PEIDNA复合物经尾静脉注射导入小鼠体内取肝心脾肺肾等主要器官做冰冻切片置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况以裸质粒和阳离子脂质体lipofect-amineTM2000作为对照结果琼脂糖凝胶电泳和结合实验结果显示三种不同溶媒的GC-PEI聚合物均能有效地结合DNA在聚合物与DNA质量比为251时聚合物结合DNA能力最佳与DNA的结合率可达93GC-PEIDNA复合物能保护所携带的DNA免受核酸酶和血清的降解复合物粒径大小分布于50200nm之间时其形成的粒子呈规则的球形有明显的核壳结构在150mmolLNaCl中复合物粒径最大其次为在001MPBS中在5GS中复合物形成粒子最小随着聚合物与DNA质量比的增大0251251复合物的粒径结合能力zeta电位均发生明显的变化其中复合物的粒径变小而DNA结合能力及zeta电位增大在低质量比时GC-PEIDNA复合物在150mmolLNaCl中表现出不稳定出现相互聚集现象MTT结果表明GC-PEI聚合物在检测范围内对5种细胞均未显示出明显毒性相对细胞活力值均高于80形态学观察显示GC-PEI聚合物50μgmL组与阴性对照组细胞形态相似动物体内急性毒性实验显示通过尾静脉注射50300μg剂量的GC-PEI聚合物入小鼠后实验小鼠两周内无急性毒性反应和死亡发生通过HE染色形态学观察实验组小鼠主要器官无明显病理变化荧光显微镜和流式细胞仪检测证实GC-PEIDNA复合物在肝细胞系QSG7701QSG7701coreL02中的GFP表达明显高于非肝细胞系SGC-7901HBE细胞GC-PEIDNAPBS复合物的转染效率高于GC-PEI5GSDNA组游离半乳糖可拮抗GC-PEIDNA复合物在QSG7701core中的转染效率GC-PEIDNA复合物在含血清培基中的转染效率较无血清时略有下降体内实验表明转染48小时后两复合物组GC-PEIPBSDNAGC-PEI5GSDNA的小鼠肝组织在荧光显微镜下可以明显检测到绿色荧光点于转染1周后荧光表达减弱而心脾肺肾等余主要器官中检测不到GFP表达两对照组肝组织中未见明显荧光结论-PEI聚合物能够在体内外特异性将外源基因导入肝细胞具有良好的肝1GC靶向性2GC-PEIDNA复合物能有效地结合和保护DNA3在检测范围内GC-PEI聚合物对细胞和组织未呈现明确毒性4如何提高体内转染效率是有待研究的问题目的构建去唾液酸糖蛋白受体介导的半乳糖基-壳聚糖-聚乙烯亚胺肝靶向非病方法第一部分以毒转基因载体研究其在体内外的肝靶向转染效率壳聚糖和乳糖酸先合成半乳糖化壳聚糖作为去唾液酸糖蛋白受体的配体再通过透析法在半乳糖壳聚糖的骨架上偶联低分子量PEI合成半乳糖化壳聚糖聚乙-C1在001MPBS150mmolLNaCl5GS中自组装成烯亚胺聚合物与pEGFP三种不同溶媒介导的GC-PEIDNA复合物通过琼脂糖凝胶电泳和结合实验研究-PEIDNA复合物结合和组装DNA能力并通过血清和DNase消化实验三种GC来检测GC-PEI复合物对DNA的保护能力为了筛选出最合适的GC-PEIDNA复合物及其最佳质量比选用透射电子显微镜和粒径分析仪来检测复合物粒径大小及形态粒径分析仪进行Zeta电位测定第二部分在体外通过MTT法检测聚合物对5种细胞QSG7701QSG7701coreL02SGC-7901HBE的毒性并将聚合物尾静脉注入小鼠观察其体内急性毒性反应第三部分GC-PEI聚合物在体内外的肝靶向转染效率研究GC-PEIDNA复合物分别转染肝细胞系QSG7701QSG7701coreL02及非肝细胞系SGC-7901HBE细胞以阳离子脂质体lipofectamineTM2000裸DNA分别做为阳阴性对照置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达及通过流式细胞仪检测其转染效率此外利用血清和游离半乳糖分别检测二者对GC-PEI聚合物肝靶向转染效率的影响将二种不同溶媒的GC-PEIDNA复合物经尾静脉注射导入小鼠体内取肝心脾肺肾等主要器官做冰冻切片置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况以裸质粒和阳离子脂质体lipofect-amineTM2000作为对照结果琼脂糖凝胶电泳和结合实验结果显示三种不同溶媒的GC-PEI聚合物均能有效地结合DNA在聚合物与DNA质量比为251时聚合物结合DNA能力最佳与DNA的结合率可达93GC-PEIDNA复合物能保护所携带的DNA免受核酸酶和血清的降解复合物粒径大小分布于50200nm之间时其形成的粒子呈规则的球形有明显的核壳结构在150mmolLNaCl中复合物粒径最大其次为在001MPBS中在5GS中复合物形成粒子最小随着聚合物与DNA质量比的增大0251251复合物的粒径结合能力zeta电位均发生明显的变化其中复合物的粒径变小而DNA结合能力及zeta电位增大在低质量比时GC-PEIDNA复合物在150mmolLNaCl中表现出不稳定出现相互聚集现象MTT结果表明GC-PEI聚合物在检测范围内对5种细胞均未显示出明显毒性相对细胞活力值均高于80形态学观察显示GC-PEI聚合物50μgmL组与阴性对照组细胞形态相似动物体内急性毒性实验显示通过尾静脉注射50300μg剂量的GC-PEI聚合物入小鼠后实验小鼠两周内无急性毒性反应和死亡发生通过HE染色形态学观察实验组小鼠主要器官无明显病理变化荧光显微镜和流式细胞仪检测证实GC-PEIDNA复合物在肝细胞系QSG7701QSG7701coreL02中的GFP表达明显高于非肝细胞系SGC-7901HBE细胞GC-PEIDNAPBS复合物的转染效率高于GC-PEI5GSDNA组游离半乳糖可拮抗GC-PEIDNA复合物在QSG7701core中的转染效率GC-PEIDNA复合物在含血清培基中的转染效率较无血清时略有下降体内实验表明转染48小时后两复合物组GC-PEIPBSDNAGC-PEI5GSDNA的小鼠肝组织在荧光显微镜下可以明显检测到绿色荧光点于转染1周后荧光表达减弱而心脾肺肾结论等余主要器官中检测不到GFP表达两对照组肝组织中未见明显荧光1GC-PEI聚合物能够在体内外特异性将外源基因导入肝细胞具有良好的肝靶向性2GC-PEIDNA复合物能有效地结合和保护DNA3在检测范围内GC-PEI聚合物对细胞和组织未呈现明确毒性4如何提高体内转染效率是有待研究的问题目的构建去唾液酸糖蛋白受体介导的半乳

      糖基-壳聚糖-聚乙烯亚胺肝靶向非病毒转基因载体研究其在体内外的肝靶向转染效率方法第一部分以壳聚糖和乳糖酸先合成半乳糖化壳聚糖作为去唾液酸糖蛋白受体的配体再通过透析法在半乳糖壳聚糖的骨架上偶联低分子量PEI合成半乳糖化壳聚糖聚乙-C1在001MPBS150mmolLNaCl5GS中自组装成烯亚胺聚合物与pEGFP三种不同溶媒介导的GC-PEIDNA复合物通过琼脂糖凝胶电泳和结合实验研究三种GC-PEIDNA复合物结合和组装DNA能力并通过血清和DNase消化实验来检测GC-PEI复合物对DNA的保护能力为了筛选出最合适的GC-PEIDNA复合物及其最佳质量比选用透射电子显微镜和粒径分析仪来检测复合物粒径大小及形态粒径分析仪进行Zeta电位测定第二部分在体外通过MTT法检测聚合物对5种细胞QSG7701QSG7701coreL02SGC-7901HBE的毒性并将聚合物尾静脉注入小鼠观察其体内急性毒性反应第三部分GC-PEI聚合物在体内外的肝靶向转染效率研究GC-PEIDNA复合物分别转染肝细胞系QSG7701QSG7701coreL02及非肝细胞系SGC-7901HBE细胞以阳离子脂质体lipofectamineTM2000裸DNA分别做为阳阴性对照置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达及通过流式细胞仪检测其转染效率此外利用血清和游离半乳糖分别检测二者对GC-PEI聚合物肝靶向转染效率的影响将二种不同溶媒的GC-PEIDNA复合物经尾静脉注射导入小鼠体内取肝心脾肺肾等主要器官做冰冻切片置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况以裸质粒和阳离子脂质体lipofect-amineTM2000作为对照结果琼脂糖凝胶电泳和结合实验结果显示三种不同溶媒的GC-PEI聚合物均能有效地结合DNA在聚合物与DNA质量比为251时聚合物结合DNA能力最佳与DNA的结合率可达93GC-PEIDNA复合物能保护所携带的DNA免受核酸酶和血清的降解复合物粒径大小分布于50200nm之间时其形成的粒子呈规则的球形有明显的核壳结构在150mmolLNaCl中复合物粒径最大其次为在001MPBS中在5GS中复合物形成粒子最小随着聚合物与DNA质量比的增大0251251复合物的粒径结合能力zeta电位均发生明显的变化其中复合物的粒径变小而DNA结合能力及zeta电位增大在低质量比时GC-PEIDNA复合物在150mmolLNaCl中表现出不稳定出现相互聚集现象MTT结果表明GC-PEI聚合物在检测范围内对5种细胞均未显示出明显毒性相对细胞活力值均高于80形态学观察显示GC-PEI聚合物50μgmL组与阴性对照组细胞形态相似动物体内急性毒性实验显示通过尾静脉注射50300μg剂量的GC-PEI聚合物入小鼠后实验小鼠两周内无急性毒性反应和死亡发生通过HE染色形态学观察实验组小鼠主要器官无明显病理变化荧光显微镜和流式细胞仪检测证实GC-PEIDNA复合物在肝细胞系QSG7701QSG7701coreL02中的GFP表达明显高于非肝细胞系SGC-7901HBE细胞GC-PEIDNAPBS复合物的转染效率高于GC-PEI5GSDNA组游离半乳糖可拮抗GC-PEIDNA复合物在QSG7701core中的转染效率GC-PEIDNA复合物在含血清培基中的转染效率较无血清时略有下降体内实验表明转染48小时后PEIPBSDNAGC-PEI5GSDNA的小鼠肝组织在荧光显微镜两复合物组GC-下可以明显检测到绿色荧光点于转染1周后荧光表达减弱而心脾肺肾等余主要器官中检测不到GFP表达两对照组肝组织中未见明显荧光结论1GC-PEI聚合物能够在体内外特异性将外源基因导入肝细胞具有良好的肝2GC-PEIDNA复合物能有效地结合和保护DNA3在检测靶向性范围内GC-PEI聚合物对细胞和组织未呈现明确毒性4如何提高体内转染效率是有待研究的问题目的构建去唾液酸糖蛋白受体介导的半乳糖基-壳聚糖-聚乙烯亚胺肝靶向非病毒转基因载体研究其在体内外的肝靶向转染效率方法第一部分以壳聚糖和乳糖酸先合成半乳糖化壳聚糖作为去唾液酸糖蛋白受体的配体再通过透析法在半乳糖壳聚糖的骨架上偶联低分子量PEI合成半乳糖化壳聚糖聚乙烯亚胺聚合物与pEGFP-C1在001MPBS150mmolLNaCl5GS中自组装成三种不同溶媒介导的GC-PEIDNA复合物通过琼脂糖凝胶电泳和结合实验研究三种GC-PEIDNA复合物结合和组装DNA能力并通过血清和DNase消化实验来检测GC-PEI复合物对DNA的保护能力为了筛选出最合适的GC-PEIDNA复合物及其最佳质量比选用透射电子显微镜和粒径分析仪来检测复合物粒径大小及形态粒径分析仪进行Zeta电位测定第二部分在体外通过MTT法检测聚合物对5种细胞QSG7701QSG7701coreL02SGC-7901HBE的毒性并将聚合物尾静脉注入小鼠观察其体内急性毒性反应第三部分GC-PEI聚合物在体内外的肝靶向转染效率研究GC-PEIDNA复合物分别转染肝细胞系QSG7701QSG7701coreL02及非肝细胞系SGC-7901HBE细胞以阳离子脂质体lipofectamineTM2000裸DNA分别做为阳阴性对照置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达及通过流式细胞仪检测其转染效率此外利用血清和游离半乳糖分别检测二者对GC-PEI聚合物肝靶向转染效率的影响将二种不同溶媒的GC-PEIDNA复合物经尾静脉注射导入小鼠体内取肝心脾肺肾等主要器官做冰冻切片置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况以裸质粒和阳离子脂质体lipofect-amineTM2000作为对照结果琼脂糖凝胶电泳和结合实验结果显示三种不同溶媒的GC-PEI聚合物均能有效地结合DNA在聚合物与DNA质量比为251时聚合物结合DNA能力最佳与DNA的结合率可达93GC-PEIDNA复合物能保护所携带的DNA免受核酸酶和血清的降解复合物粒径大小分布于50200nm之间时其形成的粒子呈规则的球形有明显的核壳结构在150mmolLNaCl中复合物粒径最大其次为在001MPBS中在5GS中复合物形成粒子最小随着聚合物与DNA质量比的增大0251251复合物的粒径结合能力zeta电位均发生明显的变化其中复合物的粒径变小而DNA结合能力及zeta电位增大在低质量比时GC-PEIDNA复合物在150mmolLNaCl中表现出不稳定出现相互聚集现象MTT结果表明GC-PEI聚合物在检测范围内对5种细胞均未显示出明显毒性相对细胞活力值均高于80形态学观察显示GC-PEI聚合物50μgmL组与阴性对照组细胞形态相似动物体内急性毒性实验显示通过尾静脉注射50300μg剂量的GC-PEI聚合物入小鼠后实验小鼠两周内无急性毒性反应和死亡发生通过HE染色形态学观察实验组小鼠主要器官无明显病理变化荧光显微镜和流式细胞仪检测证实GC-PEIDNA复合物在肝细胞系QSG7701QSG7701coreL02中的GFP表达明显高于非肝细胞系SGC-7901HBE细-PEIDNAPBS复合物的转染效率高于GC-PEI5GSDNA组游离半乳糖胞GC可拮抗GC-PEIDNA复合物在Q

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